大鼠过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：大鼠过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）的含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）水平。用纯化的大鼠过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β），再与HRP标记的过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠过氧化物酶体增生物激活受体β（rat PPAR－β）的含量。

试剂盒组成

标本处理及要求

1．血清、血浆标本可直接测定；

2．尿液、脑脊液、腹腔液：2000-3000转/分离心10分钟后，取上清液待测。

3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

4．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上按序设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；再各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（ 稀释后各孔加样量都为50μl，浓 度分别为 6000 ng/L，4000ng/L ，2000 ng/L，1000 ng/L，500 ng/L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD