保证细胞间的环境无菌与稳定
首先保证工作环境干净整洁,细胞间每周定期进行紫外杀菌,每次30分钟。细胞间内保持稳定的温度、湿度及换气。
细胞实验中涉及的仪器,如:离心机、细胞计数仪、倒置显微镜、冰箱等尽量放到细胞间使用,这样可以保证和环境一起杀菌,保证仪器干净整洁,不做其他实验使用。
将要使用的耗材提前放到细胞间内,减少无关物品进入细胞间。在实验过程中减少细胞间门的开关次数,保证环境无菌。
准备好纯水要高压灭菌后放到生物安全柜中,用来配制药品试剂等。
抗生素提前配好,用过滤器过滤后分装,放到-20℃冰箱中保存备用。也可以直接用带有抗生素的培养基。
需要用的血清、胰酶要提前放到4℃冰箱中解冻。血清一般会放到-80℃保存,要逐步解冻,直接放到37℃解冻会出现絮状物会影响后期使用。
操作前要把培养基、胰酶放到37℃细胞培养箱中复温,减少低温对细胞的刺激。
将本次实验需要使用的物品移液器、枪头、移液管等提前放到生物安全柜中,打开紫外灯灭菌20-30分钟。
进入细胞间前要按顺序进行自身防护,在缓冲间换好、戴好:拖鞋、帽子、口罩、白大衣、手套。拖鞋和白大衣要是细胞间专用。
在操作前,先用酒精给手套消毒;打开生物安全柜,将工作台用酒精棉球擦拭一遍,等酒精挥发后,进行细胞实验操作。
拿入到安全柜里面的物品都要用酒精喷洒消毒。
培养基、血清、胰酶等大包装的试剂一定要进行分装到50mL、15mL离心管中使用,避免污染。如果不小心污染也不会浪费大部分试剂。
观察培养箱中的细胞,用显微镜观察细胞生长密度、生长状态,是否染菌。培养基的消耗情况,如出现培养基变黄表示细胞需要换液,培养基营养耗尽。
凡是在安全柜中打开的瓶子,用完要及时盖好,避免污染。在瓶盖打开过程中,尽量不要从其上方经过,避免细菌掉入。
做完实验收拾工作台,清理垃圾,物品归位。用酒精擦拭工作台,打开紫外灯照射20-30分钟。
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