>>遇到支原体污染，如何挽救您无比珍贵的细胞？

------支原体检测、预防、去除一步到位！

>>>导读

实验室和细胞工厂在细胞培养过程中，一直受到支原体污染的困扰，翌圣生物（YEASEN）的细胞房曾经也受到过支原体的污染，我们选择过很多进口品牌的清除剂对支原体进行灭杀，这些品牌很难做到整体清除。针对这个问题，经过我们多次的实验验证，推出了整体清除支原体的方案。我们的产品有：支原体检测、培养体系中支原体的清除、环境中支原体的清除（培养箱、水浴锅、超净台和细胞房）、支原体预防相关。

>>>背景介绍

支原体污染对细胞培养造成多方面的不良影响，已经成为在细胞培养时的一个严重问题，保守估计常规细胞培养中支原体污染率为15-35%，严重干扰实验结果的可信度。因此，定期进行支原体检测和去除，确保无支原体存在细胞培养体系内才能获得准确有效的实验数据。

什么是支原体（Mycoplasma）

    支原体又称霉形体，直径在0.1-0.3μm，是目前发现的最小的、最简单的原核生物，可以轻松地通过滤膜，混入培养系统中，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分支状等多种形态。通常依附在细胞膜表面，支原体没有刚性的细胞壁，因此普通的抗生素对它根本不起作用，实验室常见的种类有：口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、人型支原体、唾液支原体、肺支原体和梨支原体等。

图1：支原体的形态及特点

支原体污染的后果

细菌和真菌造成的污染相对比较容易检测、预防和去除，然而支原体造成的污染很难察觉，即使生长密度高达 107-109 CFU/mL，也很难有污染迹象（浑浊、pH 变化等）。支原体污染后会导致细胞生长变慢，状态变差，不会马上使细胞致死，但会影响细胞内的各种参数，如改变细胞膜抗原性，改变细胞新陈代谢，干扰核酸的合成，改变 DNA 转染效率，导致染色体畸变等。

图2：受支原体污染后细胞出现的相关状态的改变

典型的支原体污染来源

①细胞之间交叉染；                                       

②工作环境或实验器材的污染；                         
③实验者无菌操作不佳；
④培养基或其他试剂污染；

⑤制备细胞的原始组织或器官的污染；

细胞培养遇到支原体污染，怎么办

图3：支原体污染整体解决方案

>>>Yeasen三位一体帮您解决细胞支原体污染问题

一、支原体检测

一步法恒温支原体检测：

Yeasen一步法恒温支原体检测试剂采用独有的等温扩增技术，在颜色判别方面具有更强的辨识度，由紫红色（阴性）向天蓝色（阳性）的变化，更利于肉眼的判别。

图4：一步法支原体检测操作流程

PCR法支原体检测：

Yeasen PCR支原体检测法不同于普通的一步法PCR检测方法，将原先的1对引物提高至3对引物，针对支原体16s和23s保守区进行巢式PCR扩增，在改变产品非特异性的同时大大提升了产品的灵敏度，可以检测低至单个拷贝的支原体。

 图5: PCR法扩增含不同浓度支原体样品获得的凝胶电泳图

表1：Yeasen一步法恒温支原体检测试剂所能检测的支原体种类

【注】蓝色部分为一步法恒温检测和PCR法支原体检测所能检测的相同支原体

二、MycAwayTM 支原体去除试剂（1000×）

MycAway^TM 支原体去除试剂（1000×）是一种混合制剂，可通过抑制 DNA 和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清除效果且对细胞无伤害，最大程度上挽救您的细胞，减少因支原体污染带来的损失。

                                                                                                          图6：细胞去除效果的展示

支原体去除试剂的特点：

毒性低：对细胞毒性小，不影响后续细胞实验，如细胞活力检测和细胞转染等；

稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效作用；

操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；

起效快：“立竿见影”、最快3天即可见效；

去除范围广：能去除实验室绝大多数支原体类型。

                                                             图7：支原体去除试剂细胞毒性检测图示

三、支原体预防

>>>FAQ

Q:如何检测新鲜的培养基是否有支原体污染？

A:把新鲜的培养基放在CO₂培养箱中培养48小时（样品），吸取一定的上清进行检测。如果样品的颜色变成天蓝色或者出现PCR扩增条带，则证明含有支原体污染。

Q:对于同一个样品，为什么一步法恒温试剂盒检测结果为阳性，而PCR检测为阴性呢？

A:一步法恒温检测试剂盒检测的支原体的种类是27种，而PCR检测方法检测的是常见的13种支原体。样品中污染的支原体可能不包括在PCR法检测的支原体种类内。

Q:对于同一个样品，为什么PCR结果为阳性，而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性？

A:PCR方法的灵敏度要高于一步法恒温检测法，可以检测单个拷贝的支原体，而一步法需要103个拷贝的支原体数目。

Q:巢式PCR法和一步法恒温支原体检测试剂盒到底哪个比较好呢？

A:客户可以根据自己的实验需求选择相应的产品，也可以联合使用两者对支原体进行鉴定。

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